Інгібуючий вплив засобу «Трициклол» на експресію ядерного транскрипційного фактора NF-kB (ядерний фактор «каппа-бі») в фіброзної тканини печінки


Анотація
«Трициклол» - дієтичне речовина для медичних цілей, до складу якого входять корінь володушкі, полин веничная і волосоподібна, корінь вайди фарбувальної, лимонник китайський, порошок жовчного міхура кабана і боби мунг. Даний засіб надає інгібуючий вплив на експресію ядерного транскрипційного фактора NF-kB в фіброзної тканини печінки. Лабораторні щури були поділені на групи. Одна з груп отримувала шляхом внутрішньошлункового введення засобу «Трициклол» (з розрахунку 921 мг / кг ваги) один раз на добу, а інші - розчини. Результати експерименту фіксувалися до кінця 8-й і 13-й тижні від його початку. Вони показали, що ступінь ураження печінки і її фіброз в дослідній групі була більш вираженою в порівнянні з контрольною групою, а ступінь ураження випікання і її фіброз в групі, що отримувала засобу «Трициклол», була набагато нижче в порівнянні з досвідченою групою. Дослідження на експресію білка р65 ядерного транскрипційного фактора NF-kB показало велику ступінь експресії білка р65 ядерного транскрипційного фактора NF-kB в дослідній групі в порівнянні з контрольною групою, а також виражене інгібуючу вплив засобу «Трициклол» на експресію ядерного транскрипційного фактора NF-kB в фіброзної тканини печінки за даними, отриманими через 8 і 13 тижнів після початку експерименту. Результати експерименту з вищевказаними тваринами продемонстрували здатність засобу «Трициклол» знижувати ступінь ураження печінки і її фіброзу, а інгібуючий вплив даного засобу на експресію ядерного транскрипційного фактора NF-kB може стати однією з його мішеней для досягнення протівофіброзное ефекту.

Мета дослідження
Вивчити в експерименті вплив засобу «Трициклол» на експресію ядерного транскрипційного фактора NF-kB в фіброзної тканини печінки щурів з проміжною і пізньою стадією фіброзу печінки.

Матеріали для дослідження

Лабораторні тварини
Лабораторні щури лінії Спрег-Доулі обох статей вагою 150-180г, надані Центром лабораторних тварин «Shanghai Super-B & K Laboratory Animal Corp. Ltd.» (неінфіковані тварини).

Методи і результати дослідження
1. Вплив засобу «Трициклол» на патоморфологічні зміни у щурів з фіброзом печінки, індукованим чотирьоххлористим вуглецем (CCl4).

Результати дослідження: Часточки печінки у щурів з контрольної групи мали цілісну структуру, розташування гепатоцитів було правильним, ознак інфільтрації печінки запальними клітинами не виявлено. У щурів з дослідної групи була зафіксована жирова і гідропічна дистрофія гепатоцитів, а також їх плямистий некроз на 8-й і 13-му тижні від початку експерименту. До 13 тижня утворилася повна фіброзна сепТу за рахунок розростання сполучної тканини, часточки печінки фрагментований на помилкові часточки, а фіброзна сепТу инфильтрированной клітинами хронічного запалення. У щурів з групи, що одержувала засіб «Трициклол», на 8-й і 13-му тижні експерименту явища гидропической і жирової дистрофії, інфільтрації запальними клітинами і розростання фіброзної тканини печінки були менш виражені, ніж у щурів з дослідної групи. На 8-й і 13-му тижні експерименту різниця в стані фіброзної тканини печінки у даної групи в порівнянні з контрольною та дослідною групами була очевидна (Р <0,01).

Таблиця 1. Шкала оцінки фіброзу печінки у щурів, індукованого чотирьоххлористим вуглецем, на 8-й і 13-му тижні експерименту

Час (тиждень)

Група

Оцінка фіброзу печінки

0

I

II

III

IV

V

VI

8 (n=8)

Контрольна

8

0

0

0

0

0

0

Дослідна

0

0

0

2

2

4

0

Яка отримала «Трициклол»

0

2

1

1

1

3

0

13 (n=10)

Контрольна

10

0

0

0

0

0

0

Дослідна

0

0

0

2

2

6

0

Яка отримала «Трициклол»

0

1

0

5

4

0

0



1. Розподіл білка р65 ядерного транскрипційного фактора NF-kB в тканинах і клітинах печінки щурів з фіброзом, індукованим чотирьоххлористим вуглецем (CCl4).

Щури лінії Спрег-Доулі в кількості 54 особин були розподілені у випадковому порядку на дві групи в залежності від тривалості експерименту (8 і 13 тижнів). У свою чергу ці дві групи були поділені ще на три групи кожна: контрольна група, досвідчена група і група, що отримувала засіб «Трициклол» (в розрахунку 921 мг / кг ваги). З першої доби експерименту щурам (за винятком особин з контрольної групи) робилися підшкірні ін'єкції в область спини 10% -го розчину CCl4 на рафінованому арахісове олії з розрахунку 0,5 мл на 100 г ваги двічі на тиждень протягом 8 і 13 тижнів відповідно. Контрольній групі і дослідній групі проводилося внутріжелудочное введення такого ж самого кількості розчину натрій-карбоксиметилцелюлози (CMC-Na) в концентрації 5 г / л один раз на добу протягом 8 і 13 тижнів відповідно.

Результати дослідження: У щурів з контрольної групи експресія білка р65 ядерного транскрипційного фактора NF-kB в тканинах печінки була менш виражена (Рис. 1, 4), а у щурів з дослідної групи - інтенсивно виражена і розподілена в цитоплазмі і ядрах клітин (Рис. 2, 5 ). Позитивна реакція фарбуванням на білок р65 ядерного транскрипційного фактора NF-kB була відзначена в осередку фіброзу, на стінці печінкового синусоїда, стінці кровоносних судин і частини клітин жовчної протоки. Позитивна реакція фарбуванням також спостерігалася в гепатоцитах з жирової і гидропической дистрофією.

Результати експерименту на 8-й і 13-й тижні, проведеного над щурами з фіброзом, індукованим чотирьоххлористим вуглецем, показали велику ступінь експресії білка р65 ядерного транскрипційного фактора NF-kB в тканинах печінки щурів з дослідної групи в порівнянні з щурами з контрольної групи. Різниця в експресії білка р65 ядерного транскрипційного фактора NF-kB в тканинах печінки щурів з дослідної групи на 8-му тижні і 13-му тижні - не настільки очевидна. Результати експерименту, проведеного над щурами з фіброзом, індукованим чотирьоххлористим вуглецем, після закінчення 8-й і 13-й тижнів показали інгібуючий вплив (Р <0,01) на експресію білка р65 ядерного транскрипційного фактора NF-kB в тканинах печінки щурів з групи, одержувала засіб «Трициклол» (Рис. 3, 6).

Таблиця 2. Вплив засобу «Трициклол» на експресію білка р65 ядерного транскрипційного фактора NF-kB в тканинах печінки щурів з фіброзом, індукованим чотирьоххлористим вуглецем

Час (тиждень)

Група

Середня оптична щільність (±s)

8

Контрольна

0,253±0,021**

Дослідна

0,351±0,027

Що отримала «Трициклол»

0,304±0,039**

13

Контрольна

0,249±0,020**

Дослідна

0,357±0,034

Що отримала «Трициклол»

0,332 ±0,033**



У порівнянні з дослідною групою, **Р<0,01.

Висновок
Результати вищевказаного експерименту свідчать про наявність інгібуючого впливу засобу «Трициклол» на перебіг хронічного пошкодження печінки і її фіброзу, індукованих чотирьоххлористим вуглецем (CCl4), а також про те, що таке інгібуючий вплив на експресію ядерного транскрипційного фактора NF-kB в фіброзних тканинах печінки може стати однією з його мішеней для досягнення протівофіброзное ефекту.

Список літератури (1) Crabb DW. Pathogenesis of alcoholic liver disease: newer mechanisms of injury. Keio J Med, 1999, 48 (4):184-188
(2) Luckey SW, Petersen DR. Activation of Kupffer cells during the course of carbon tetrachloride-induced liverinjury and fibrosis in rats. Exp Mol Pathol, 2001, 71(3):226-240
(3) Hellerbrand C, Jobin C, Iimuro Y, et al. Inhibition of NFkappaB in activated rat hepatic stellate cells by proteasome inhibitors and an I-κappaB super-repressor.Hepatology, 1998, 27 (5):1285-1295
(4) Lee KS, Buck M , Houglum K, et al. Activation of hepatic stellate cells by TGF alpha and collagen type I is mediated by oxidative stress through c-myb expression. J Clin Invest. 1995, 96 (5):2461-2468
(5) Bedossa P. Paradis V. T ransforming growth factorbeta (TGF-beta):a key-role in liver fibrogenesis. J Hepatol, 1995, 22 (2 Suppl):37-42
(6) Yichun Wu, Qiang Wu, Yan Yang, etc. Change to expression of NF-κB, TGF-β 1 and its I receptor for rats with middle-stage and final-stage liver fibrosis. Acta Universitatis Medicinalis Anhui. 2004, 39 (5):324-332
(7) Juntian Zhang (chief editor). Modern Pharmacology Experiment Methods. Beijing: Joint Publishing House of Beijing Medical University and China Xie-He Medical University, 1998, 1398-1400
(8) Baoen Wang, Huiji Wang, Jiaxuan Zhu, etc. Experiment Research and Clinical Observation of Different Dosages of Salvia Root Compound as Chinese Traditional Herb on Treatment of Liver Fibrosis. Chinese Journal of Hepatology, 1993, 1 (1):64-72
(9) Bissell DM. Hepatic fibrosis as wound repair:a progress report. J Gastroenterol, 1998, 33 (2):295-302
(10) Lawrence DA. T ransforming growth factor-beta:an overview. Kidney Int Suppl, 1995, 49:19-23
(11) Kononen J, Bubendorf L , Kallioniemi A , et al. Tissue microarrays for high-throughput molecular profiling of tumor specimens. Nat Med, 1998, 4 (7):844-847

Проектувальник дослідження: Ічунь У
Відповідальний за проведення дослідження: Мінцзе Чень, Ічунь У, Цян У, Янь Ян, Фен Ян, Міньчжу Чень
Організація проведення дослідження: Клінічна лікарня Медичного коледжу провінції Аньхой