Дослідження на токсичність засобу «Трициклол» при його тривалому застосуванні

Анотація
«Трициклол» - традиційний китайський засіб, основними інгредієнтами якого є порошок жовчного міхура кабана, екстракт плодів лимонника китайського, гепатопротекторний екстракт і порошок бобів мунг. Результати дослідів, проведених на щурах з вивчення токсичності при тривалому застосуванні засобу, свідчать про те, що у щурів, які отримували «Трициклол» (в дозуванні 5 г / кг ваги і 2 г / кг ваги) протягом 60 послідовних днів, істотного впливу на вага, показники крові, функцію печінки і нирок, а також на стан життєво важливих органів відзначено не було. Патологічних змін в життєво важливих органах за даними мікроскопічного дослідження також не було виявлено.

Мета дослідження
Визначення токсичності і безпечної дози шляхом спостереження за токсичної реакцією у щурів, які отримували засіб «Трициклол».

Матеріали для дослідження

Підготовка
Засіб «Трициклол», наданий фармацевтичною компанією «Хейлунцзян Учан» [Heilongjiang Wuchang Pharmaceutical Company]. Номер партії: 9206102, 9207202. Вага однієї таблетки - 0,35 г (вміст екстрактивних речовини в одній таблетці - 0,25 г).

Лабораторні тварини
Лабораторні щури лінії Вістар, виведені і надані Центром лабораторних тварин Хейлунцзянскій академії традиційної китайської медицини. Вага тварин становив від 95 г до 145 г.

Групування лабораторних тварин
Щури в кількості 60 особин були розподілені у випадковому порядку на 3 групи в залежності від ваги, по 20 щурів у кожній групі (по 10 самок і 10 самців). Групи були розподілені по дозуванні «Трициклола»: група високої дози, група низькою доза, група нормальної дози (контрольна група). Тварини вирощувалися в лабораторних умовах, мали вільний доступ до води, температура в лабораторії становила 18 ± 1 ° С, умови освітлення і вентиляції були хорошими. До початку офіційного дослідження за тваринами здійснювалося спостереження протягом 1 тижня.

Метод дослідження.

Спосіб і час введення: годування через шлунковий зонд, один раз на добу, за винятком неділі, на протязі в цілому 60 днів.

Дозування: Група високої дози отримувала засіб «Трициклол» по 5 г (зміст екстрактивних речовини - 3,57 г) / кг ваги щура, група високої дози отримувала засіб «Трициклол» по 2 г (вміст екстрактивних речовини - 1,43 г) / кг ваги щура, контрольна група отримувала воду в тій же кількості (20 мл / кг).

Параметри спостереження: Проводилось зважування кожної особини до введення препарату і зважування через кожні 30 днів після введення препарату. Здійснювалося спостереження за активністю щурів і характером їх харчування. Після закінчення 60 днів у кожної щури в кожній групі були взяті аналізи на показники крові, а також на функцію печінки і нирок. Половина особин в кожній групі була забита відразу, а друга половина - через 15 днів після введення останньої дози засіб. Для дослідження серця, печінки, селезінки, легенів і нирок, а також для оцінки стану цих органів, умертвіння щури були анатомувати, після чого було проведено гістологічне дослідження. В кінцевому результаті були отримані статистичні дані по досліджуваним параметрам в кожній групі.

Результати дослідження

I. Загальний стан. Протягом періоду введення препарату вага, активність і характер харчування тварин в кожен групі були в межах норми, шерсть - блищала, а випорожнення були оформлені. У таблиці 1 наведені результати впливу засобу на вагу.

Таблиця 1. Порівняльні показники впливу засобу «Трициклол» на вагу щурів (x±SDг)

Група

До введення

Післе введення

30 днів

60 днів

Самки

Контрольна

122,6±11,04

144,4±20,77

164,6±24,78

Высокої дози

122,5±11,42

146,7±13,87

166,7±23,48

Низької дози

125,9±15,10

149,3±19,91

158,8±22,04

Самці

Контрольна

125,7±21,21

144,0±17,76

163,8±21,68

Высокої дози

124,5±22,09

156,9±13,92

160,4±23,94

Низької дози

123,3±18,30

144,6±19,38

157,5±22,41



Результати, наведені в таблиці 1, свідчать про те, що у щурів (як у самок, так і у самців), які отримували засіб «Трициклол» у зазначеній вище дозуванні протягом 60 послідовних днів, істотного впливу на їх вагу в порівнянні з контрольною групою відзначено не було.

II. Вплив на рівень еритроцитів і гемоглобіну. Докладні результати наведені в таблиці 2.

Таблиця 2. Порівняльні показники впливу засіб «Трициклол» на рівень еритроцитів і гемоглобіну

Група

Еритроцити

(±SDx1012/л)

Гемоглобін

(±Spг/л)

Самки

Контрольна

4,68±0,721

109,5±14,57

Высокої дози

4,37±0,848

106,5±10,89

Низької дози

4,47±0,791

108,6±8,45

Самці

Контрольна

4,31±0,684

115,4±13,12

Высокої дози

4,63±0,940

112,3±7,09

Низької дози

4,72±0,560

109,8±8,12



Результати, наведені в таблиці 2, свідчать про те, що у щурів (як у самок, так і у самців), які отримували засіб «Трициклол» у зазначеній вище дозуванні протягом 60 послідовних днів, істотного впливу на рівень еритроцитів і гемоглобіну в порівнянні з контрольною групою відзначено не було.

III. Вплив на рівень лейкоцитів, лімфоцитів і нейтрофілів. Докладні результати наведені в таблиці 3.

Таблиця 3. Порівняльні показники впливу засіб «Трициклол» на рівень лейкоцитів, лімфоцитів і нейтрофілів (x ± Sp)

Група

Лейкоцити

(109/л)

Лімфоцити

(%)

Нейтрофіли

(%)

Самки

Контрольна

9,13±2,283

54,5±9,27

44,5±10,96

Високої дози

9,30±2,516

57,2±9,16

42,8±9,16

Низької дози

9,60±1,890

51,3±10,41

47,7±10,62

 Самці

Контрольна

9,16±1,960

54,61±9,92

52,7±10,61

Високої дози

10,22±1,790

52,4±11,82

47,6±11,83

Низької дози

8,98±1,720

51,7±9,61

47,2±9,52



Результати, наведені в таблиці 3, свідчать про те, що у щурів (як у самок, так і у самців), які отримували засіб «Трициклол» у зазначеній вище дозуванні протягом 60 послідовних днів, істотного впливу на рівень лейкоцитів, лімфоцитів і нейтрофілів в порівняно з контрольною групою відзначено не було.

IV. Вплив на функцію печінки і нирок. Для визначення рівня печінкових трансаміназ (АЛТ і АСТ) в сироватці крові використовувався колориметрический метод, а для визначення рівня азоту сечовини в сироватці крові використовувався діацетілмонооксімний хромогенний метод. Докладні результати наведені в таблиці 4.

Таблиця 4. Порівняльні показники впливу засіб «Трициклол» на рівень печінкових трансаміназ і сечовини в сироватці крові (x ± Sp)

Група

Трансамінази

(од./100 мл сироватки)

Азот сечовини

(ммоль/л)

Самки

Контрольна

56,82±10,689

9,41±1,155

Високої дози

41,35±12,558*

9,38±0,997

Низької дози

41,50±13,355*

8,99±1,377

Самці

Контрольна

60,80±14,640

9,39±1,535

Високої дози

39,21±15,288*

9,31±1,561

Низької дози

42,27±17,398*

9,19±1,396



Примітка: У порівнянні з контрольною групою * Р <0,05.>
Результати, наведені в таблиці 4, були оброблені статистично і свідчать про те, що в кожної експериментальної групи щурів (незалежно від того, чи була це група самок або самців, а також чи була це група високої дози або низької дози) спостерігалося значне вплив на зниження рівня печінкових трансаміназ (АЛТ і АСТ) в порівнянні з контрольною групою (Р <0,05), однак показники у всіх групах залишалися в межах норми, встановленої для щурів. Вираженого впливу на рівень азоту сечовини не було відзначено в усіх групах.

V. Вплив на кількість загального білка і альбумінів в сироватці крові. Для визначення кількості загального білка в сироватці крові використовувався біуретова реакція, а для визначення концентрації альбуміну використовувався метод з Бромкрезоловий зеленим реактивом. Докладні результати наведені в таблиці 5.

Таблиця 5. Порівняльні показники впливу засіб «Трициклол» на кількість загального білка і концентрацію альбуміну в сироватці крові (x ± Sp)

Група

Загальний білок в сироватці крові (г/л)

Альбуміни в сироватці крові (г/л)

Самки

Контрольна

63,28±8,66

40,81±5,767

Високої дози

64,35±10,21

38,92±5,731

Низької дози

67,33±8,26

37,68±6,213

Самці

Контрольна

63,18±11,76

43,12±5,151

Високої дози

64,42±7,88

41,86±6,430

Низької дози

65,43±10,65

43,66±5,109



Результати, наведені в таблиці 5, свідчать про те, що у щурів (як у самок, так і у самців), які отримували засіб «Трициклол» у зазначеній вище дозуванні протягом 60 послідовних днів, істотного впливу на кількість загального білка і концентрацію альбуміну в сироватці крові відзначено не було.

VI. Вплив на стан життєво важливих органів. Після умертвіння щурів в кожній групі і дослідження стану їх серця, печінки, селезінки, легенів, нирок і яєчок була обчислена оцінка стану життєво важливих органів кожної особини. Остаточні статистичні розрахунки наведені в таблиці 6.

Таблиця 6. Порівняльні показники впливу засіб «Трициклол» на серце, печінку, селезінку, легені, нирки і яєчка щурів (x ± Sp%)

Група

Серце

Печінка

Селезінка

Легені

Нирки

Яєчка

Самки

Контрольна

0,65±0,063

5,80±0,743

0,86±0,088

1,83±0,609

1,38±0,098

 

Високої дози

0,65±0,060

5,84±0,704

0,93±0,165

1,87±0,378

1,45±0,123

 

Низької дози

0,62±0,056

5,60±0,660

0,77±0,112

1,56±0,470

1,40±0,108

 

Самці

Контрольна

0,64±0,055

5,78±0,650

0,81±0,107

1,62±0,657

1,19±0,096

2,81±0,325

Високої дози

0,63±0,061

5,66±0,718

0,75±0,085

1,31±0,376

1,32±0,154

3,18±0,418

Низької дози

0,62±0,057

5,55±0,672

0,78±0,117

1,37±0,284

1,24±0,107

2,92±0,369



Результати, наведені в таблиці 6, свідчать про те, що у щурів (як у самок, так і у самців), які отримували засіб «Трициклол» у зазначеній вище дозуванні протягом 60 послідовних днів, істотного впливу на стан життєво важливих органів відзначено не було.

VII. Анатомо-патологічне дослідження життєво важливих органів. Після взяття зразків крові тварини були вбиті. Потім були вилучені відповідні життєво важливі органи, взяті зразки тканин, проведена стандартна фіксація, препарування і фарбування гематоксилін-еозином, після чого під мікроскопом були досліджені серце, печінка, селезінка, легені, нирки, яєчка і яєчники на предмет присутності в них патологічних змін. Результати дослідження наведені нижче.

Серце: Патологічних змін в кардіоміоцитах, ендокардит,
Печінка: Патологічних змін в клітинах печінки, печінкових часточках і междолькових структурах у всіх трьох групах не виявлено.
Селезінка: Патологічних змін в червоній пульпі, білої пульпи і тканинних структурах у всіх трьох групах не виявлено.
Легкі: Патологічних змін в тканинах бронхів на всіх рівнях і епітеліальних тканинах у всіх трьох групах не виявлено. Морфологічних змін в альвеолах легенів, альвеолярном мішку і альвеолярної стінки не виявлено.
Нирки: Патологічних змін в клубочках, ниркових канальцях і канальцевом епітелії у всіх трьох групах не виявлено.
Яєчка: На всіх етапах були присутні сперматоціти; безліч зрілих сперматогонієв і сперматозоїдів в насінних канальцях зареєстровано у всіх трьох групах.
Яєчники: Патологічних змін в тканинних структурах і різних фолікулах у всіх трьох групах не виявлено.

Результати свідчать про те, що у щурів, які отримували засіб «Трициклол», патологічні зміни в життєво важливих органах відсутні.

Висновки

Результати вищевказаного дослідження на токсичність засіб «Трициклол» при його тривалому застосуванні показали відсутність істотного впливу на вагу, рівень еритроцитів, гемоглобіну і лейкоцитів у щурів, які отримували засіб «Трициклол» (в дозуванні 5 г / кг ваги (вміст екстрактивних речовини - 3,57 г) і 2 г / кг ваги (вміст екстрактивних речовини - 1,43 г)) протягом 60 послідовних днів. Також не було відзначено значної зміни рівня печінкових трансаміназ (АЛТ і АСТ), азоту сечовини, кількості загального білка і концентрації альбумінів в сироватці крові. Суттєвого впливу на стан життєво важливих органів відзначено не було. Патологічних змін в життєво важливих органах, таких як серце, печінка, селезінка, легені, нирки, яєчка і яєчники, за даними мікроскопічного дослідження також не було виявлено. Відповідно до вищенаведених результатами експериментального дослідження засобу «Трициклол» визнаний дієтичним речовиною для медичних цілей, які не мають істотного токсичного впливу.